• 醫(yī)療與生命科學(xué)

蛋白質(zhì)內(nèi)的色氨酸殘?jiān)茏贤饩€激發(fā)可產(chǎn)生本征熒光。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)從折疊的自然狀態(tài)進(jìn)入變性狀態(tài)的時(shí)候，發(fā)射光譜將輕微變化，反映了折疊構(gòu)型的變化。

目的：

測(cè)定溶菌酶中處于天然態(tài)和變性狀態(tài)色氨酸的本征熒光。

為了進(jìn)行這個(gè)分析，對(duì)溶菌酶的天然和變性狀態(tài)本征熒光進(jìn)行了測(cè)量。溶菌酶為14.3 kDa 蛋白質(zhì)，具有6色氨酸殘基。色氨酸的激發(fā)波長(zhǎng)為280 nm，發(fā)射波長(zhǎng)350 nm。

實(shí)驗(yàn)條件：

下列樣品送交分析：

• 0.5 mg/mL溶菌酶的K2HPO4溶液50 mM，pH值：7.4 -天然蛋白質(zhì)
• 0.5 mg/mL溶菌酶的 K2HPO4溶液，pH值：7.4，6 M胍HCl -變性蛋白質(zhì)
• 50 mM K2HPO4，pH值：7.4，50 mM K2HPO4，pH值：7.4，6 M胍HCl 

將數(shù)毫升的溶菌酶溶液轉(zhuǎn)移到一個(gè)石英試管，光程長(zhǎng)1 cm。用UV-LVF-L濾光片使激發(fā)一側(cè)300 nm以下的光通過。同時(shí)對(duì)緩沖劑的熒光進(jìn)行了測(cè)量，以確保它們?cè)谑褂脳l件下不發(fā)出熒光。

使用的硬件：

• USB2000 (USB2E4066) 光柵1
• UV2/OFLV-4探測(cè)器
• L2透鏡
• 200 um光闌
• PX2脈動(dòng)氙燈光源
• CUV-FL-DA 直插式試管托架
• UV-LVF-L UV低通線性可變?yōu)V波器
• CVD-DIFFUSE
• P600-2-UV-VIS（紫外線-可見光）
• 石英試管（CV-Q-10）

實(shí)驗(yàn)參數(shù)：

• 積分時(shí)間（ms）：500
• 光譜平均值：10
• 平滑次數(shù)：10

測(cè)量模式：

• 熒光

結(jié)果：

圖1為天然和變性的溶菌酶溶液和緩沖劑測(cè)量的熒光光譜。注意：與蛋白質(zhì)的折疊狀態(tài)相關(guān)的熒光存在輕微的頻變。